原型物種人

來源熒光素酶基因標(biāo)記的肝癌細(xì)胞(HepG2-luc)原位成瘤

模式動物品系SPF級Balb/c-nude 裸鼠，健康，雄性，5W，體重為18g~20g。

實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組。

實(shí)驗(yàn)周期4-6 weeks

建模方法目前在肝癌研究中多采用異體移植法將腫瘤細(xì)胞株注射到動物皮下形成局部瘤塊來構(gòu)建移植瘤模型，相比機(jī)體原發(fā)性肝癌的形成及病理生理學(xué)變化仍有一定不同。通過向裸鼠肝臟注射肝癌細(xì)胞建立肝臟原位腫瘤模型，觀察其原位瘤成瘤的過程及狀態(tài)，能較好的模擬人體肝癌生長過程，為進(jìn)一步抗肝癌免疫研究提供實(shí)驗(yàn)動物模型。
1. 細(xì)胞株： 熒光素酶基因標(biāo)記的人肝癌細(xì)胞株HepG2-luc。
2. 裸鼠肝臟原位成瘤模型的建立：
2.1 將標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)的處于對數(shù)生長期的HepG2-luc 細(xì)胞消化、離心，將所得的約 5×10 6 個(gè)細(xì)胞溶于 0.1 mL DMEM 培養(yǎng)液待用。
2.2 使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，待麻醉生效后，開腹暴露肝臟，用1ml胰島素注射針取準(zhǔn)備好的細(xì)胞注射于裸鼠肝臟內(nèi)，用5-0絲線縫合傷口，活力碘消毒傷口，將裸鼠放在加熱墊上，待清醒后正常飲食飼養(yǎng)。
3. 熒光活體成像檢測：在成瘤后對裸鼠進(jìn)行生物發(fā)光活體成像檢測，成像前使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，再通過腹腔注射3mg底物 luciferin，底物注射后20~30分鐘后進(jìn)行生物發(fā)光活體成像檢測。

應(yīng)用HepG2-luc原位成瘤可用于研究肝癌轉(zhuǎn)移的過程