原型物種
來源
模式動物品系
實驗分組
實驗周期
建模方法
應用
1 大體觀察
觀察各組大鼠腦表面周圍的積血/血凝塊情況。
2 神經認知功能評分
分別于損傷后48h,參照Kaoutzanis等的行為學評分:
自由進食2分,拒絕進食1分;
運動反應:自由行走5分,行走困難4分,不能行走3分。
刺痛時肢體收縮2分,刺痛時無反應1分;
睜眼反應:自行睜眼4分,聲音刺激睜眼3分,刺痛睜眼2分,不能睜眼1分。總分11分。
3 生理學檢測
測定血腦屏障的變化。
血腦屏障滲透性測定:
⑴腦組織中伊文氏藍(EB)含量的測定參照周永剛等方法,首先建立標準回歸曲線,取EB 10mg溶于100ml生理鹽水中,取0.1ml加入1.9ml甲酰胺中混勻作為第一管,再從中取0.1ml加入1.9ml甲酰胺中混勻作為第二管,依次取1ml加入1ml甲酰胺中混勻作為第三管,類推并共做6管,37℃水浴48h,采用熒光分光光度儀610nm進行比色,蒸餾水做空白。按公式計算腦組織EB含量:腦組織EB含量(μg/g腦組織):A×甲酰胺量(mL)÷腦濕重(g)(A為根據標準曲線回歸方程,求得的樣品EB含量,單位為ng/mg)。
⑵各組大鼠于處死前1h經股靜脈注射2%伊文氏藍(EB)2ml/kg,為清除血液中染料,用穿刺針向左心室關注生理鹽水,直至右心室流出清澈透明液體為止,開顱快速切取大鼠顳底皮層腦組織稱重。將樣品放入盛有50%三氯乙酸(TCA)溶液1.5ml的勻漿器中,勻漿和離心(10000r/min,20min),取上清液1.0ml,放入1.5ml混合液(50%TCA和無水乙醇按1:3比例配制而成),充分混勻。檢測。
4 HE染色:
在SD大鼠成功建模48h后,給予10%水合氯醛進行腹腔注射麻醉(3-4ml/kg),立即進行斷頭取腦組織,取血凝塊周圍的腦皮層組織,用于觀測各組老鼠腦組織損傷情況,切片進行全景掃描。
5 免疫組化
取血凝塊周圍的腦皮層組織,使用MBL-C抗體檢測,切片進行全景掃描。
6 原位細胞凋亡檢測TUNEL實驗
取血凝塊周圍的腦皮層組織,檢測各組大鼠蛛網膜下腔出血后組織細胞的凋亡情況。切片進行熒光全景掃描。
7 WB檢測蛋白質表達
取血凝塊周圍的腦皮層組織檢測MBL-2、C3、TLR4、p65、p-p65表達水平。
應用SPSS軟件進行統計分析,計量資料以均數±標準差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯
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