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  • [pics:title]

慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型

歡迎咨詢:025-8666 8061
  • 編號DSI557Ra02
  • 物種Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
  • 下載英文說明書 中文說明書
  • 規格每例
  • 價格 ¥ 1440

基礎信息
  • 原型物種

  • 來源吸煙致慢性阻塞性肺病

  • 模式動物品系SPF級SD大鼠,健康,3-4W,雄性,體重為190-230g。

  • 實驗分組實驗分兩組:正常對照組和模型組。

  • 實驗周期4 weeks

  • 建模方法1. 第1天、第14天將大鼠用乙醚吸入麻醉后,暴露喉頭,以靜脈套管針替代氣管導管行氣管插管,向大鼠氣管內注入200 μg/kg(200 μg/ml溶于生理鹽水中) LPS(lipopolysaccharide,脂多糖),完畢后將大鼠直立旋轉10-20s,使LPS均勻分布于肺部。
    2. 第2-13天,15-28天,每天在有機玻璃密閉箱(70×60×60cm3)持續吸入新鮮的香煙霧45min,15支/天,使密閉箱煙霧濃度約為100-120 mg/m3。每天熏煙后立刻用低于環境溫度(20℃)5℃冷空氣刺激1小時,造模28天結束。

  • 應用疾病模型

模型評價

1. 觀察各組大鼠的活動量、毛發、食量、呼吸、體重等。每周給食前1h稱重,觀察體重的變化。
2. RT-qPCR檢測
收集大鼠PBMC和肺組織,提取RNA,利用RT-PCR檢測Foxp3、RORγT的表達。
3. Western blot檢測
收集大鼠PBMC和肺組織,提取蛋白,采用western-blot檢測TAZ水平。
4. 流式細胞檢測外周血T淋巴細胞亞群
收集各組大鼠腹主動脈血2ml左右,利用大鼠外周血淋巴細胞分離液提取外周血單個核細胞(PBMC)細胞懸液。
(1)檢測Th17時,細胞懸液加入佛波酯(50ng/ml)、離子霉素(1μg/ml)和莫能菌素(2μmol/L),37℃、5%CO2培養箱終培養6h后,反復洗滌3次后100μL PBS重懸,然后加入CD4單克隆抗體10μL,混勻后4℃避光孵育30min,洗滌、固定、破膜,再加入IL-17單克隆抗體10μL,4℃避光孵育20min,反復洗滌后PBS重懸為500μL/管,樣品置流式細胞儀檢測CD4+IL-17+細胞占CD4+T細胞的比例。
(2)檢測Treg細胞時,細胞懸液先加入CD4、CD25單克隆抗體各10μl,混勻后4℃避光孵育30min,洗滌、固定、破膜,再加入FoxP3單克隆抗體10μL,4℃避光孵育20min,反復洗滌后PBS重懸為500μL/管,樣品置流式細胞儀檢測CD4+CD25+FoxP3+細胞占CD4+T細胞的比例。

組織病理學

HE染色:右肺葉組織固定包埋切片,HE染色,觀察肺組織病理變化情況。

標志因子水平

ELISA檢測:
檢測血清和支氣管肺泡灌洗液中的IL-17和IL-10水平。
支氣管肺泡灌洗液(BALF)抽取方法:大鼠取血后,開胸,分離縱膈,注射器抽取3ml生理鹽水從氣管插管推入肺中,每次反復灌洗3次后抽出灌洗液,肺泡灌洗液以4℃ 3000r/min離心15min,取上清。
血清提取方法:將收集于血清分離管中的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜,然后 1,000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,將上清置于-20oC 或-80oC 保存,避免反復凍融。

統計學分析

應用SPSS軟件進行統計分析,計量資料以均數±標準差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯


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