1.血管鈣含量測定: 取10mg腹主動脈溶于硝酸消化、烤干，用含有
27nmol/LKCl和 27μmol/L LaCl3的去離子水復溶，用原子分光光度計在442.7nm
處讀取吸光度，后換算成組織鈣含量(以μmol/gdw 表示)
2.ALP活性測定：取腹主動脈勻漿，8000×g離心10 min，取上清液。考馬
斯亮藍法蛋白定量。按試劑盒說明方法測定血管組織ALP活性，紫外分光光度計
在405nm處讀取吸光度。具體步驟：加入緩沖液，370C孵育30min，NaOH終止反應，測定405nm下的吸收值。ALP活性用p2硝基苯酚為標準值計算，1單位表示30min內產生1nM硝基酚的活性。BCA法測定總蛋白定量，校正ALP活性。

病理組織Von Kossa染色:
取大鼠胸主動脈段，用石蠟包埋胸主動脈后切片，４μｍ厚切片，常規脫蠟、脫水。1%硝酸銀溶液浸泡，日光下照射30min后，將玻片浸入5%硫代硫酸鈉溶液1min，后用堿性品紅返染。脫水、透明、封片，用光鏡觀察。

主動脈鈣化面積百分比測算：取主動脈弓至胸主動脈段血管1cm，沿縱
軸剪開后Von Kossa 染色，用Image-Pro Plus 6.0 病理圖像分析軟件計算各實驗
組大鼠鈣化斑塊面積百分比。

免疫組化法觀察RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG水平：DAB顯
色，蘇木素復染，常規梯度乙醇脫水，中性樹膠封片觀察。陰性對照以PBS代替一抗進行染色。每只大鼠隨機取3張結腸切片，每張切片光學顯微鏡下隨機選取5個高倍視野，統計每個視野中陽性組織細胞的積分光密度值(IOD值)與檢測面積的比值，即平均光密度值(MOD)，以代表染色強度。

Western blot 檢測RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG 蛋白表達

應用SPSS軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（x ±ｓ）表示，采用ｔ檢驗，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05表示有顯