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蛋白與免疫服務(wù)

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動物行為及影像學(xué)服務(wù)

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坐骨神經(jīng)損傷(SNI)大鼠模型

歡迎咨詢:025-8666 8061
  • 編號DSI838Ra01
  • 物種Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
  • 下載英文說明書 中文說明書
  • 規(guī)格每例
  • 價格 ¥ 1440

基礎(chǔ)信息
  • 原型物種

  • 來源夾閉坐骨神經(jīng)干導(dǎo)致坐骨神經(jīng)損傷

  • 模式動物品系SPF 級SD大鼠,雄性,8 周

  • 實驗分組隨機分組:對照組,模型組,陽性藥物組,受試藥物組(三個劑量梯度組),15只每組

  • 實驗周期4 weeks

  • 建模方法建模方法:對雄性大鼠行腹腔注射麻醉。將大鼠俯臥位固定于鼠固定架上,鋪孔巾,暴露鼠左下肢并剪掉鼠毛。碘酒、酒精消毒三遍,于左側(cè)股后正中行縱行、長約6-8mm切口,暴露皮下肌肉。用止血鉗鈍性分離股二頭肌、半腱肌、半膜肌后,分離出白色、粗大的坐骨神經(jīng),刺激后左足出現(xiàn)抽動。距坐骨結(jié)節(jié)6-8mm處(定位);用大止血鉗夾閉坐骨神經(jīng)干,壓滿3扣;擠壓5秒鐘后松開止血鉗,間隔10秒后再夾閉5秒鐘,再放松10秒,第三次再夾閉5秒(定時)。神經(jīng)干擠壓傷寬度約3mm。9-0無創(chuàng)縫線標記后,將坐骨神經(jīng)送回原位,整理肌肉,縫合創(chuàng)口;假手術(shù)組大鼠麻醉后,僅切開皮膚暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)但不做鉗夾,在相應(yīng)部位相同方法標記后縫合。

    后期取材:將取出的動物飼養(yǎng)一周,結(jié)束后,注射水合氯醛麻醉大鼠,將鼠仰臥位固定于大鼠固定架上。自頜下至小腹行胸、復(fù)聯(lián)合切口,切斷肋骨,剪斷膈肌,暴露出跳動的心臟。用16號針頭由左心尖刺入左心室,用軟靜脈留置導(dǎo)管沿左心室經(jīng)主動脈瓣插入主動脈,剪開右心耳。先用0.9%生理鹽水250ml快速沖洗組織內(nèi)血液,其后用4%多聚甲醛固定液快速推注100ml,再緩慢推注100ml,直至使鼠尾巴翹起,身體逐漸僵硬,顏色變白為止。灌注后,立即將身體一僵硬的鼠于俯臥位固定于手術(shù)臺上,由胸-骶部沿脊柱正中切開,暴露及分離背部肌肉,沿十二肋肌部切斷T12 L1水平脊柱、脊髓。沿坐骨神經(jīng)走行切腰4、腰5、骶1段脊髓和包括擠壓傷在內(nèi)的上下各2mm的坐骨神經(jīng)。同法切取假手術(shù)組的相應(yīng)部位等長標本。分三種方法進行處理及固定。(1) 4%多聚甲醛固定液中固定,制備石蠟切片。(2) 2.5%戊二醛液固定后,備做電鏡。(3)液氮中冷凍,備做冰凍切片。

  • 應(yīng)用疾病模型

組織病理學(xué)

1、大鼠坐骨組織病理檢查
坐骨神經(jīng)組織在4%多聚甲醛中固定24 小時后,包埋成石蠟塊。石蠟塊放在-20℃冰箱中冰一下,在切片機上進行切片,切片厚度4um,置于水槽中展開、撈片和貼片。石蠟切片切好后需要烤片,60℃烤片2 小時。進行Loyez蘇木精染色,光鏡下觀察再生髓鞘的情況。
2、 TUNEL檢測坐骨神經(jīng)組織凋亡情況
坐骨神經(jīng)組織切片脫蠟,蛋白酶K室溫下消化,TDT酶反應(yīng)液37℃孵育 1 h,0.3%H2O2抑制內(nèi)源性過氧化物酶,Streptavidin-HRP 室溫5min,DAB 顯色,蘇木精復(fù)染。陰性對照采用無酶標記液(去除TDT)代替TDT酶反應(yīng)液。凋亡細胞核呈棕褐色顆粒,光鏡下觀察并計數(shù)凋亡細胞。
3、電鏡觀察自噬情況
坐骨神經(jīng)組織2.5%戊二醛液固定,制備電鏡樣品,利用電鏡在超微結(jié)構(gòu)水平觀察坐骨神經(jīng)組織中自噬情況。

統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標準差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯


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