原型物種
來源
模式動物品系
實驗分組
實驗周期
建模方法
應(yīng)用
1.最小紅斑劑量(MED)劑量的確定:
選用2根UVB燈管和4根UVA燈管,造模前,UV燈管預(yù)熱10 min,鼠籠與UV燈管相距30 cm(此時輻照儀測的 UVA 的總輻照量是3.25 uW/cm2 左右;UVB 的總輻照量是0.134 uW/cm2 左右;這個值略有波動)。
選8只ICR小鼠,用剃毛器將小鼠背部的毛剃掉,再使用8%硫化鈉將殘留的毛發(fā)脫干凈,然后設(shè)置4個不同輻照的時間點:分別照射10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘,每個時間點2只小鼠,到輻照時間點,取出小鼠,正常飼養(yǎng),第2日觀察小鼠背部的紅斑情況。輻照10分鐘和15分鐘的小鼠,無明顯紅斑;輻照20分鐘的小鼠能看到輕微的紅斑,輻照30分鐘的小鼠,紅斑很明顯。此處選用輻照20分鐘,作為預(yù)試所得最小紅斑劑量(MED)
1個MED=(3.25 uW/cm2+0.134 uW/cm2)*20分鐘*60=4 mJ/cm2
2.全鼠背部拍照
于第4周以及第8周取樣前,拍攝全鼠背部照片,以確定是否出現(xiàn)光老化特征(皺紋粗深、松弛等)。
3. 免疫指標: 脾臟和胸腺指標的測定
小鼠稱重并執(zhí)行頸椎脫位,并立即從小鼠中取出脾臟和胸腺,立即稱重。胸腺和脾臟指數(shù)根據(jù)下述方程
計算:胸腺或脾臟指數(shù)(mg/g)=胸腺或脾臟重量/體重。
指數(shù)(TI)和脾指數(shù)(SI)可作為免疫指標。
組織學(xué)分析
在最終紫外照射后的24h內(nèi)取皮膚標本進行組織化學(xué)研究。小鼠皮膚樣品在4%緩沖中性福爾馬林溶液中固定24h,并嵌入石蠟中,連續(xù)切片。
抗氧化指標
1. 皮膚抗氧化指標分析
取小鼠背部皮膚組織(約2厘米×3厘米,平均分為8塊,一塊加福爾馬林固定,用于病理檢測;一塊加RNA later保存,-80度保存,用于測序;剩余的6塊,每2塊放在一個管子里面,-80度保存)。
2. 血清中抗氧化活性
實驗結(jié)束時,小鼠禁食12小時,但允許自由進入水。血液從眼球中收集到離心管中。在離心后(7000 g,4℃,15分鐘)從血液樣品中獲得血清,然后冷凍并儲存在20℃直到分析
應(yīng)用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標準差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯
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